常见问题
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2024-01-09
如何计算引物的Tm值
引物设计软件都可以给出Tm,与引物长度、碱基组成、引物使用缓冲的离子强度有关。长度为25mer以下的引物,Tm计算公式为:Tm = 4℃(G + C)+ 2℃(A + T)对于更长的寡聚核苷酸,Tm计算公式为:Tm =···
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2024-01-09
已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了
如果溶解引物的水PH过低或污染了菌或核酸酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,避免反复冻溶。建议使用10mMTris pH7.5缓冲液溶解···
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2024-01-09
为什么引物的OD260/OD280小于1.5
引物应该全是DNA,但是OD260/OD280的比值为什么那么低,怎么会有蛋白质污染?引物化学合成,哪里有机会污染到蛋白质?需要指出的是OD260/OD280的比值不能用来衡量引物的纯度。OD260/OD280的比值···
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2024-01-09
Primer设计的基本原则是什么
引物设计的下列原则供您参考。◆引物长度一般在18-35mer。◆G-C含量控制在40-60%左右。◆避免近3’端有酶切位点或发夹结构。◆如果可能避免在3’端最后5个碱基有2个以上的G或C。◆如果可能避免在···
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2024-01-09
TaqMan 探针设计的基本原则是什么
下列原则供您参考。◆TaqMan探针位置尽可能靠近扩增引物(扩增产物50-150bp),但不能与引物重叠。◆长度一般为18-40mer。◆G-C含量控制在40-80%左右。◆避免连续相同碱基的出现,特别是要避免G···
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2024-01-09
如果测序发现突变,该如何处理
遇到这种情况,首先和核酸合成厂家取得联系,生产人员会检查生产的原始记录,主要是核对合成序列是否和定单一致,他们在电脑中一般会保留所有原始数据。在确认引物合成序列没有输错的情况下,建···
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2024-01-09
测序发现引物有突变是怎么回事
测序发现引物区域有突变,特别是40个碱基以下的引物,发生的概率不大,但是肯定也会发生。用户一般可以放心,引物序列一般都是通过电脑直接将您的序列COPY到合成仪的,碱基输错的机会不多。核酸合···
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2024-01-09
引物片段退火后不能连接到载体上是什么问题
连接反应需要引物的5’磷酸基团。如果需要将合成的引物退火直接连接相应的载体上,引物需要磷酸化。磷酸化的产物如果还不能连接载体上,需要检查载体的酶切效果,需要改善引物退火的条件。SiRNA···